上尾义美(上尾 ますみ)(又译上尾真澄、上尾真须美、上尾真美、上尾增美、上尾益美)
日本配音员：三石琴乃
香港配音员：吴小艺(第211-315集、剧场版8、11)→庄巧儿(第608集起、剧场版28)、周恩恩(剧场版20、23)
台湾配音员：王瑞芹、林美秀(暂代)，许云云(TV版集数精选-DVD版)
原为松坂梅受伤住院期间的代课老师，后成为樱花班导师，23岁，2月23日生，血型A型。最爱吃甜甜圈。深度近视，平常习惯戴着眼镜，性格略显阴暗，胆小懦弱且不敢大声说话;一旦摘下眼镜，便会因为无法看清周遭人事物，个性变得爽朗直率且容易冲动，更能坦白大声说话。和黑矶先生的关系甚为暧昧，亦是少数看过黑矶先生把墨镜拿下后样子的人。
上尾真澄
日语：上尾ますみ(あげおますみ)、上尾先生(あげおせんせい)
为双叶幼稚园樱花班教师。十分擅长使用电脑，坐在电脑前时也会像摘下眼镜一样性格发生变化，变成爱自言自语的自恋形态。常常带着一副大眼镜，而被小新认为很帅而很崇拜她。喜欢吃甜甜圈，在戴着眼镜的时候十分胆小还患有严重的恐高症，暗恋对象是黑矶。
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